冠心病，冠狀動(dòng)脈粥樣硬化性心臟病的簡(jiǎn)稱，是一種常見(jiàn)的復(fù)雜性疾病，由遺傳因素、環(huán)境因素或兩者相互作用所致。從全球看，冠心病越來(lái)越成為威脅人類生命和健康的因素，其發(fā)病率和死亡率近年來(lái)呈現(xiàn)總體上升的態(tài)勢(shì)，是重大的公共衛(wèi)生問(wèn)題。
近日，浙江大學(xué)遺傳學(xué)研究所管敏鑫教授課題組在國(guó)際著名期刊《核酸研究》在線發(fā)表最新研究成果，首次構(gòu)建攜帶線粒體基因組15927位置上轉(zhuǎn)運(yùn)核糖核酸（tRNA）基因突變的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells，HUVEC）轉(zhuǎn)線粒體細(xì)胞系，檢測(cè)了該突變對(duì)冠心病相關(guān)組織 — 內(nèi)皮細(xì)胞功能的影響，揭示了線粒體tRNA改變導(dǎo)致冠心病的致病機(jī)理，并為線粒體基因突變致病的組織特異性研究提供了新的思路。
這項(xiàng)研究的第一作者為浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院博士后賈子冬，共同通訊作者為浙江大學(xué)遺傳學(xué)研究所管敏鑫教授和王猛副教授。
緣起：線粒體基因突變是冠心病的危險(xiǎn)因素之一
線粒體是人體細(xì)胞內(nèi)普遍存在的一種細(xì)胞器，通過(guò)氧化磷酸化產(chǎn)生細(xì)胞各種生理活動(dòng)所需約90%的ATP，是為細(xì)胞維持功能和代謝提供能量的“發(fā)電廠”。除了提供能量，線粒體產(chǎn)生細(xì)胞內(nèi)約95%的活性氧，還是細(xì)胞凋亡、血紅素合成、類固醇合成、鈣離子調(diào)控和適應(yīng)性產(chǎn)熱的控制中心。另外，線粒體通過(guò)多種信號(hào)通路調(diào)控代謝平衡，炎癥和衰老等重要生理活動(dòng)，是多種重要細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的調(diào)控中心。因此，線粒體的正?；顒?dòng)對(duì)心血管系統(tǒng)的健康至關(guān)重要。
管敏鑫課題組關(guān)于冠心病的這項(xiàng)研究，緣起于2011年對(duì)北京地區(qū)心血管疾病患者線粒體基因突變的一次大規(guī)模篩查。在那次篩查中，科研人員發(fā)現(xiàn)數(shù)個(gè)呈母系遺傳特征的高血壓和冠心病家系，并鑒定出可能與高血壓和冠心病發(fā)生相關(guān)的一系列編碼tRNA的線粒體基因突變位點(diǎn)，其中就包括該研究中的線粒體突變位點(diǎn)。
當(dāng)時(shí)，課題組經(jīng)過(guò)功能排查研究，已經(jīng)鎖定了該位點(diǎn)突變（線粒體tRNAThr 15927G>A）為冠心病發(fā)生的危險(xiǎn)因素之一，但對(duì)其致病機(jī)理尚不明確。
因此，探究相關(guān)致病機(jī)制成為管敏鑫團(tuán)隊(duì)亟待解決的一個(gè)難題。
創(chuàng)新亮點(diǎn)：首次“雜交”完成含有“異源線粒體”的血管內(nèi)皮細(xì)胞
致病機(jī)制研究的第一個(gè)難關(guān)就在于生物實(shí)驗(yàn)樣本的選定。
線粒體基因突變致病的組織特異性一直是線粒體疾病研究的難點(diǎn)，這個(gè)“難點(diǎn)”就難在沒(méi)有生物實(shí)驗(yàn)樣本可以研究。一個(gè)原因是當(dāng)時(shí)有個(gè)技術(shù)瓶頸，即無(wú)法對(duì)線粒體進(jìn)行直接的基因編輯，無(wú)法通過(guò)基因編輯構(gòu)建細(xì)胞或動(dòng)物模型進(jìn)行研究；另一個(gè)原因是無(wú)法確定病人的什么組織作為直接的實(shí)驗(yàn)素材。
怎么辦？細(xì)胞的“雜交”開(kāi)始了。
眾所周知，與冠心病發(fā)生相關(guān)的組織包括血管內(nèi)皮，血管平滑肌和巨噬細(xì)胞等。其中，血管內(nèi)皮損傷是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的根本原因之一，也是病理過(guò)程早期最主要的標(biāo)志。
本次研究中，管敏鑫團(tuán)隊(duì)的科研人員巧妙地選取被廣泛應(yīng)用于動(dòng)脈粥樣硬化相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究中的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，將其線粒體剔除，并提取患者淋巴細(xì)胞中基因變異的線粒體，將兩者合二為一進(jìn)行“雜交”，首次構(gòu)建出攜帶線粒體特殊位點(diǎn)突變的病人特異轉(zhuǎn)線粒體細(xì)胞系。
七年科研進(jìn)行曲：從分子和細(xì)胞層面探討線粒體基因突變對(duì)冠心病的影響
線粒體中tRNA的作用是搬運(yùn)氨基酸合成蛋白質(zhì)，管敏鑫課題組通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)線粒體發(fā)生基因突變時(shí)，原來(lái)正常折疊起來(lái)的三維結(jié)構(gòu)發(fā)現(xiàn)異常，穩(wěn)態(tài)水平和氨?；浇档?，導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成減少。原因是tRNA用于搬運(yùn)氨基酸的分子減少，同時(shí)有的分子無(wú)效搬運(yùn)增大。
圖1. 分子動(dòng)力學(xué)模擬顯示線粒體tRNAThr結(jié)構(gòu)穩(wěn)定性降低
如何更好了解這個(gè)研究，管敏鑫團(tuán)隊(duì)的科研人員向我們打了個(gè)比方。將tRNA結(jié)合氨基酸的過(guò)程看作是一個(gè)高成功率的娃娃機(jī)抓布偶的過(guò)程。作為娃娃機(jī)抓手的tRNA，因?yàn)榛蛲蛔?，?dǎo)致相關(guān)堿基對(duì)斷開(kāi)并影響周圍力學(xué)平衡后，整個(gè)結(jié)構(gòu)受到影響。這種影響表現(xiàn)為作為抓手的tRNA直接減少，無(wú)法結(jié)合氨基酸。另一個(gè)結(jié)果是留下來(lái)的抓手中出現(xiàn)“次品”無(wú)法結(jié)合氨基酸，“抓空率”大幅增加。這兩個(gè)原因?qū)е峦尥迿C(jī)抓布偶的tRNA結(jié)合氨基酸整體比例降低，進(jìn)而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成減少，引發(fā)下游一連串連鎖反應(yīng)。
第一個(gè)連鎖反應(yīng)是在線粒體層面，線粒體的正常功能出現(xiàn)失常。由于蛋白質(zhì)數(shù)量的減少，科研人員通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，線粒體出現(xiàn)了氧化呼吸功能障礙，線粒體膜電位降低，以及活性氧增加?！斑m度的活性氧作為信號(hào)傳導(dǎo)是必須的，但是活性氧大量增殖后，會(huì)氧化細(xì)胞中的各類大分子?！辟Z子冬說(shuō)，“如同蘋果‘生銹’影響口感，過(guò)度的氧化會(huì)導(dǎo)致分子損傷，從而導(dǎo)致功能受到影響。”
第二個(gè)連鎖反應(yīng)發(fā)生在內(nèi)皮細(xì)胞層面。線粒體功能缺陷最終導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞凋亡水平增高，科研人員發(fā)現(xiàn)，內(nèi)皮細(xì)胞的遷移能力和成血管能力雙雙降低，表明血管內(nèi)皮細(xì)胞的正常功能發(fā)生損傷。
圖2. 攜帶突變HUVEC體外血管生成能力改變
展望：為治療冠心病發(fā)現(xiàn)新的潛在靶點(diǎn)
“血管內(nèi)皮損傷正是冠狀動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生的根本原因之一。”管敏鑫表示，課題組從分子和細(xì)胞層面探討了線粒體特定位點(diǎn)突變?cè)诠谛牟〔±磉^(guò)程中的作用，為冠心病的致病機(jī)制和治療方法研究提供了新的視角?！斑@個(gè)首次驗(yàn)證的發(fā)病機(jī)理，為治療發(fā)現(xiàn)新的潛在靶點(diǎn)?！绷硗?，課題組所使用的研究方法也將為其它線粒體疾病的組織特異性研究提供新的啟發(fā)。
該研究工作獲得國(guó)家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃（973計(jì)劃），國(guó)家自然科學(xué)基金以及博士后科學(xué)基金等的支持。參與該研究的作者還有浙江大學(xué)遺傳學(xué)研究所的碩士生張曄、李強(qiáng)和葉真珍等。
原文鏈接：https://academic.oup.com/nar/advance-article/doi/10.1093/nar/gky1241/5239030?searchresult=1
（柯溢能/圖片由課題組提供）
