14次不同方案的化療、20次放療、全胃切除手術(shù)……自從4年多前被確診為“彌漫大B細(xì)胞淋巴瘤”， 來自廣東的孫先生（化名）就開始了漫長而又痛苦的治療，幾乎所有方案都嘗試過了，然而療效一直不盡人意，腫瘤反復(fù)復(fù)發(fā)。
“命運(yùn)已經(jīng)給我判了‘死刑’，整個(gè)人感覺猶如掉進(jìn)了萬丈深淵一般。”
2020年5月，孫先生來到浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院，經(jīng)過前期的評(píng)估，接受了全新的PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞治療，如今孫先生無病生存已超過2年。
“感謝新的CAR-T療法，給了我第二次生命！”
這是迄今為止全球CAR-T細(xì)胞治療難治復(fù)發(fā)淋巴瘤中高緩解率和低毒副反應(yīng)的最好臨床結(jié)果，標(biāo)志著中國學(xué)者在CAR-T細(xì)胞研發(fā)及臨床轉(zhuǎn)化應(yīng)用領(lǐng)域處于國際領(lǐng)先地位。
全球首次，研制新型CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品
以往CAR-T細(xì)胞制備是采用患者本身的淋巴細(xì)胞在體外通過病毒轉(zhuǎn)染的方法，將針對(duì)腫瘤靶點(diǎn)的CAR分子整合到T淋巴細(xì)胞中，形成CAR-T細(xì)胞。目前在北美已經(jīng)有6個(gè)CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品上市，其中5個(gè)為針對(duì)CD19靶點(diǎn)，1個(gè)針對(duì)BCMA多發(fā)性骨髓瘤靶點(diǎn)，在中國已上市2款針對(duì)難治復(fù)發(fā)淋巴瘤的CD19靶點(diǎn)CAR-T產(chǎn)品。
這些CAR-T產(chǎn)品的上市，為難治復(fù)發(fā)惡性淋巴瘤患者帶來了生的希望，成為惡性腫瘤治療領(lǐng)域最具有突破性的技術(shù)。
不過，傳統(tǒng)的CAR-T產(chǎn)品還存在著一些亟待突破的問題——
1.用病毒轉(zhuǎn)染方法制備CAR-T細(xì)胞存在著靶點(diǎn)隨機(jī)插入導(dǎo)致CAR-T細(xì)胞質(zhì)量良莠不齊；
2.隨機(jī)插入基因片段有導(dǎo)致腫瘤基因改變的風(fēng)險(xiǎn)；
3.目前的CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品對(duì)難治復(fù)發(fā)淋巴瘤的完全緩解率約為50%左右，療效還有待提高；
4.淋巴瘤治療中由于腫瘤細(xì)胞的快速殺滅和細(xì)胞因子釋放而導(dǎo)致全身的嚴(yán)重反應(yīng)，在臨床上被稱為細(xì)胞因子釋放綜合征和免疫效應(yīng)細(xì)胞相關(guān)的神經(jīng)毒性綜合征。
為此，全球的科研工作者都在努力研發(fā)非病毒定點(diǎn)靶向基因轉(zhuǎn)導(dǎo)技術(shù)，從而消除目前CAR-T制備方法存在的不足，并進(jìn)一步對(duì)免疫細(xì)胞中的關(guān)鍵基因進(jìn)行改造，達(dá)到更好的療效和更低的毒副反應(yīng)。
浙大一院黃河教授團(tuán)隊(duì)與邦耀生物劉明耀教授團(tuán)隊(duì)合作，利用2020年獲諾貝爾獎(jiǎng)的CRISPR/Cas9基因編輯技術(shù)對(duì)T淋巴細(xì)胞中PD1位點(diǎn)精確敲除，定點(diǎn)插入針對(duì)腫瘤細(xì)胞的靶向CD19 CAR分子，構(gòu)建完成全新的非病毒定點(diǎn)整合CAR-T細(xì)胞（PD1-19bbz）。
實(shí)驗(yàn)室研究結(jié)果表明，使用同源臂長度為800bp的線性雙鏈DNA作為模板可以通過同源介導(dǎo)修復(fù)（HDR）機(jī)制獲得數(shù)量最多的CAR整合細(xì)胞；PD1-19bbz無論在PD-L1高表達(dá)還是低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中，都體現(xiàn)出更強(qiáng)大、更持久的殺傷效果，小鼠生存率得到顯著提高。
世界首例，非傳統(tǒng)CAR-T細(xì)胞治療淋巴瘤臨床研究
當(dāng)2020年孫先生來到浙大一院時(shí)，腹腔內(nèi)多發(fā)淋巴瘤病灶，且淋巴瘤侵犯腸壁。黃河團(tuán)隊(duì)研究認(rèn)為，淋巴瘤侵犯腸壁是CAR-T治療的相對(duì)禁忌癥，在接受CAR-T細(xì)胞治療時(shí)容易發(fā)生腸穿孔，因此，孫先生已不再適合接受傳統(tǒng)的CAR-T細(xì)胞治療，而全新的PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞，發(fā)生細(xì)胞因子風(fēng)暴和其他并發(fā)癥的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)低，“這或許可以給病人一個(gè)生還的機(jī)會(huì)?！?/p>
在完成各項(xiàng)臨床研究報(bào)批后，2020年5月26日，浙大團(tuán)隊(duì)為孫先生輸注PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞，回輸后的6月9日，孫先生CAR-T細(xì)胞回輸后14天各項(xiàng)指標(biāo)正常，經(jīng)評(píng)估后出院，在回輸后1個(gè)月進(jìn)行PET-CT評(píng)估，結(jié)果顯示原腹腔侵犯腸道粘膜部位的大包塊腫瘤已完全消失。如今孫先生無病生存已超過2年。
團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步開展臨床研究，結(jié)果表明，在接受治療患者中未觀察到CAR-T治療相關(guān)的神經(jīng)毒性和2級(jí)以上的細(xì)胞因子釋放綜合征，證明PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞具有出色的臨床安全性。用PCR技術(shù)和流式細(xì)胞術(shù)方法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞在患者體內(nèi)可獲得快速擴(kuò)增和長時(shí)間的維持。在難治復(fù)發(fā)淋巴瘤患者中，客觀緩解率高達(dá)100%，完全緩解率達(dá)到87.5%。進(jìn)一步利用單細(xì)胞測(cè)序技術(shù)研究PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞體內(nèi)作用機(jī)制，結(jié)果表明PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品中存在高比例的記憶性T細(xì)胞，體內(nèi)PD1-19bbz CAR-T細(xì)胞具有更強(qiáng)的殺傷腫瘤作用，長期存續(xù)的CAR-T細(xì)胞具有記憶性細(xì)胞的特征。這也全面闡明了非病毒PD1定點(diǎn)整合CAR-T細(xì)胞優(yōu)越的臨床療效背后的作用機(jī)制。
在最近的一次隨訪中，孫先生的所有檢查項(xiàng)目均達(dá)標(biāo)，體重也比患病前增加了不少，臉色看起來也更紅潤了?！敖?jīng)過細(xì)胞治療后身體感覺一下子就恢復(fù)正常了，親朋好友也都說我是奇跡般地康復(fù)了，現(xiàn)在閑暇時(shí)還會(huì)去打打羽毛球，完全恢復(fù)了患病前的生活狀態(tài)。感謝新型CAR-T細(xì)胞療法，讓我還能看到兒子上大學(xué)。感謝浙大一院黃河院長團(tuán)隊(duì)的精心治療，幫助我戰(zhàn)勝病魔，獲得重生。” 時(shí)隔兩年，2022年夏天，孫先生給杭州的醫(yī)護(hù)人員們分享了好消息：兒子確定被國內(nèi)頂尖大學(xué)美術(shù)學(xué)院錄?。?/span>
這項(xiàng)研究于北京時(shí)間8月31日刊登在國際頂尖雜志《自然》上，浙大一院胡永仙主任醫(yī)師等為論文共同第一作者，黃河教授為第一通訊作者，邦耀生物劉明耀教授為共同通訊作者，其團(tuán)隊(duì)成員張楫欽為第一作者。
（采訪整理：吳雅蘭 柯溢能）
