14次不同方案的化療、20次放療、全胃切除手術……自從4年多前被確診為“彌漫大B細胞淋巴瘤”， 來自廣東的孫先生（化名）就開始了漫長而又痛苦的治療，幾乎所有方案都嘗試過了，然而療效一直不盡人意，腫瘤反復復發(fā)。

“命運已經(jīng)給我判了‘死刑’，整個人感覺猶如掉進了萬丈深淵一般?！?/span>

 2020年5月，孫先生來到浙江大學醫(yī)學院附屬第一醫(yī)院，經(jīng)過前期的評估，接受了全新的PD1-19bbz CAR-T細胞治療，如今孫先生無病生存已超過2年。

“感謝新的CAR-T療法，給了我第二次生命！”

這是迄今為止全球CAR-T細胞治療難治復發(fā)淋巴瘤中高緩解率和低毒副反應的最好臨床結(jié)果，標志著中國學者在CAR-T細胞研發(fā)及臨床轉(zhuǎn)化應用領域處于國際領先地位。

全球首次，研制新型CAR-T細胞產(chǎn)品

以往CAR-T細胞制備是采用患者本身的淋巴細胞在體外通過病毒轉(zhuǎn)染的方法，將針對腫瘤靶點的CAR分子整合到T淋巴細胞中，形成CAR-T細胞。目前在北美已經(jīng)有6個CAR-T細胞產(chǎn)品上市，其中5個為針對CD19靶點，1個針對BCMA多發(fā)性骨髓瘤靶點，在中國已上市2款針對難治復發(fā)淋巴瘤的CD19靶點CAR-T產(chǎn)品。

這些CAR-T產(chǎn)品的上市，為難治復發(fā)惡性淋巴瘤患者帶來了生的希望，成為惡性腫瘤治療領域最具有突破性的技術。

不過，傳統(tǒng)的CAR-T產(chǎn)品還存在著一些亟待突破的問題——

1.用病毒轉(zhuǎn)染方法制備CAR-T細胞存在著靶點隨機插入導致CAR-T細胞質(zhì)量良莠不齊；

2.隨機插入基因片段有導致腫瘤基因改變的風險；

3.目前的CAR-T細胞產(chǎn)品對難治復發(fā)淋巴瘤的完全緩解率約為50%左右，療效還有待提高；

4.淋巴瘤治療中由于腫瘤細胞的快速殺滅和細胞因子釋放而導致全身的嚴重反應，在臨床上被稱為細胞因子釋放綜合征和免疫效應細胞相關的神經(jīng)毒性綜合征。

為此，全球的科研工作者都在努力研發(fā)非病毒定點靶向基因轉(zhuǎn)導技術，從而消除目前CAR-T制備方法存在的不足，并進一步對免疫細胞中的關鍵基因進行改造，達到更好的療效和更低的毒副反應。

浙大一院黃河教授團隊與邦耀生物劉明耀教授團隊合作，利用2020年獲諾貝爾獎的CRISPR/Cas9基因編輯技術對T淋巴細胞中PD1位點精確敲除，定點插入針對腫瘤細胞的靶向CD19 CAR分子，構(gòu)建完成全新的非病毒定點整合CAR-T細胞（PD1-19bbz）。

實驗室研究結(jié)果表明，使用同源臂長度為800bp的線性雙鏈DNA作為模板可以通過同源介導修復（HDR）機制獲得數(shù)量最多的CAR整合細胞；PD1-19bbz無論在PD-L1高表達還是低表達的腫瘤細胞中，都體現(xiàn)出更強大、更持久的殺傷效果，小鼠生存率得到顯著提高。

世界首例，非傳統(tǒng)CAR-T細胞治療淋巴瘤臨床研究

當2020年孫先生來到浙大一院時，腹腔內(nèi)多發(fā)淋巴瘤病灶，且淋巴瘤侵犯腸壁。黃河團隊研究認為，淋巴瘤侵犯腸壁是CAR-T治療的相對禁忌癥，在接受CAR-T細胞治療時容易發(fā)生腸穿孔，因此，孫先生已不再適合接受傳統(tǒng)的CAR-T細胞治療，而全新的PD1-19bbz CAR-T細胞，發(fā)生細胞因子風暴和其他并發(fā)癥的發(fā)生風險低，“這或許可以給病人一個生還的機會?！?/p>

在完成各項臨床研究報批后，2020年5月26日，浙大團隊為孫先生輸注PD1-19bbz CAR-T細胞，回輸后的6月9日，孫先生CAR-T細胞回輸后14天各項指標正常，經(jīng)評估后出院，在回輸后1個月進行PET-CT評估，結(jié)果顯示原腹腔侵犯腸道粘膜部位的大包塊腫瘤已完全消失。如今孫先生無病生存已超過2年。

團隊進一步開展臨床研究，結(jié)果表明，在接受治療患者中未觀察到CAR-T治療相關的神經(jīng)毒性和2級以上的細胞因子釋放綜合征，證明PD1-19bbz CAR-T細胞具有出色的臨床安全性。用PCR技術和流式細胞術方法檢測發(fā)現(xiàn)PD1-19bbz CAR-T細胞在患者體內(nèi)可獲得快速擴增和長時間的維持。在難治復發(fā)淋巴瘤患者中，客觀緩解率高達100%，完全緩解率達到87.5%。進一步利用單細胞測序技術研究PD1-19bbz CAR-T細胞體內(nèi)作用機制，結(jié)果表明PD1-19bbz CAR-T細胞產(chǎn)品中存在高比例的記憶性T細胞，體內(nèi)PD1-19bbz CAR-T細胞具有更強的殺傷腫瘤作用，長期存續(xù)的CAR-T細胞具有記憶性細胞的特征。這也全面闡明了非病毒PD1定點整合CAR-T細胞優(yōu)越的臨床療效背后的作用機制。

在最近的一次隨訪中，孫先生的所有檢查項目均達標，體重也比患病前增加了不少，臉色看起來也更紅潤了?！敖?jīng)過細胞治療后身體感覺一下子就恢復正常了，親朋好友也都說我是奇跡般地康復了，現(xiàn)在閑暇時還會去打打羽毛球，完全恢復了患病前的生活狀態(tài)。感謝新型CAR-T細胞療法，讓我還能看到兒子上大學。感謝浙大一院黃河院長團隊的精心治療，幫助我戰(zhàn)勝病魔，獲得重生?！?nbsp;時隔兩年，2022年夏天，孫先生給杭州的醫(yī)護人員們分享了好消息：兒子確定被國內(nèi)頂尖大學美術學院錄??！

這項研究于北京時間8月31日刊登在國際頂尖雜志《自然》上，浙大一院胡永仙主任醫(yī)師等為論文共同第一作者，黃河教授為第一通訊作者，邦耀生物劉明耀教授為共同通訊作者，其團隊成員張楫欽為第一作者。

（采訪整理：吳雅蘭 柯溢能）